学生部分日志

• 22

  2023年05月
  做实验

  将对照组和转入AD3CK1敲除盒的二尖梅奇酵母分别涂布至含100、120和140ug/mLG418的平板上，28℃培养5天计数。
• 10

  2023年06月
  做实验

  将对照组和转入AD3CK1敲除盒的二尖梅奇酵母分别涂布至含100、120和140ug/mLG418的平板上，28℃培养5天计数。对平板上的菌落进行计数...
• 28

  2023年06月
  SDS-PAGE

  超声破碎后进行SDS-PAGE。结果显示这次的表达菌株，在上清中表达了更多的可溶性蛋白，有利于实验的下一步进行。
• 01

  2023年07月
  KanMX启动子更换

  将KanMX的启动子更换，首先筛选目的片段的退火温度，发现55℃和60℃均有良好扩增（图1），大量扩增后进行切胶回收，然后进行3片段的融合PCR，采用...
• 02

  2023年07月
  KanMX启动子更换

  得到融合片段（pmb1和pmb2）分别与pRE112质粒进行无缝克隆连接，涂板后分别得到3个和4个单菌落，进行菌落PCR，目的片段正确，扩培后提取质粒...
• 03

  2023年07月
  Crisper-Cas9敲除

  将李博士构建好的Crisper质粒转入JM110菌株中,选择一个单菌落后扩培提取质粒，双酶切后与gRNARNA进行过夜连接，转化液转入DH5α菌株中，...
• 04

  2023年07月
  Pull-down

  培养50mLAD1-FLAG表达菌株，OD600达到0.6后添加IPTG在常温诱导过夜，离心后重悬在2mlTBS溶液中进行超声破碎，将破碎细胞进行离心...
• 05

  2023年07月
  Pull-down

  电泳结果图中结果条带清晰，重新进行SDS-PAGE电泳，条带跑至分离胶后停止电泳，将胶块切下来，染色后送往生工进行质谱测序分析
• 09

  2023年07月
  转化培养

  将测序正确的含有pRE112-Pmb1和pRE112-Pmb2质粒的菌株涂板复苏，液体培养后提取质粒，将两个质粒分别转入含有pUCAD3CK1质粒的S...
• 10

  2023年07月
  接合实验

  第二天按1：100的比例均再次同样放入3mL无抗LB液体中培养至OD600在0.4-0.6即可。进行接合实验，分别取含双质粒菌株和布氏肠杆菌200uL...