学生部分日志

• 22

  2023年07月
  PX扩增

  PX基因引物退火温度筛选，在30、35、40、45和50℃进行退火温度的筛选，发现该引物在cDNA中无法扩增得到目的基因。
• 23

  2023年07月
  报告菌株筛选

  细菌双杂交报告菌株初始活化筛选，选择在LB-X-GAL-IPTG平板上的白色菌落进行扩培，制备感受态细胞
• 24

  2023年07月
  PX2扩增

  引物PX2扩增的是PX基因的功能域，发现该引物可以扩增出目的片段。大量扩增后纯化准备与质粒连接。
• 25

  2023年07月
  菌落PCR

  pKT25和pUT18C质粒以及对照质粒pKT25-zip和pUT18C-zip提取、各基因片段扩增后切胶回收，双酶切后纯化，质粒与目的片段过夜连接后...
• 28

  2024年08月
  电转

  电转后涂板，对照组与实验组在50ug/mL的潮霉素板上均有3-5个单菌落长出。可能启动子不适合或密码子未优化造成的。
• 28

  2024年08月
  PCR

  PCR扩增，其中1是上游同源臂1；2上游同源臂2；3是启动子Pmb1;4是启动子Pmb2；5是下游同源臂
• 28

  2024年08月
  PCR

  由于Pmb1无法从二尖梅奇酵母基因组中扩增出来，因此使用Pmb2为模板进行扩增。然后进行切胶回收。
• 28

  2024年08月
  RNA提取

  二尖梅奇酵母（3×107）与河蟹血细胞（5×105）体积200uL,共孵育1h后改良热酚法提取RNA
• 28

  2024年08月
  PCR

  MbHyg温度梯度筛选后，大量扩增，切胶回收后进行无缝克隆连接。无缝克隆反应液转入大肠杆菌后涂板，分别命名为pUC-AD1CK1-Pmb1;pUC-A...
• 28

  2024年08月
  最低抑菌浓度筛选

  刚开始从10ug/mL作为最低筛选浓度，发现除对照外其他浓度在48h内都没有吸光度值的增加，第二次从1ug/mL作为最低筛选浓度，结果显示诺维素菌素对...